概述：

1. 独特的MicroRNA表达框架设计：有助于高效地处理加工shRNA
2. Dharmacon SMARTvector shRNA设计软件的重大突破：

• 可最大限度地筛选出沉默效应最强的序列
• 基于microRNA“seed-region”区域的生物信息滤过技术，增强活性链与RISC结合偏好性，大大增强基因沉默的特异性。

3.   即开即用型慢病毒颗粒，操作方便，功能强大：

•  广泛导向性的病毒载体系统保证了对几乎所有细胞的导入性；
•  turboGFP标签可方便通过荧光观测评价转染效率；
•  嘌呤霉素筛选标记使获得稳定基因沉默细胞株变得简单快捷。

4. 专利生产技术和工艺流程保证了高滴度、高纯度病毒颗粒的获取

理性设计确保可靠、稳定的基因沉默

    Dharmacon的SMARTvectorshRNA慢病毒表达框架整合了确保细胞成功感染和对靶基因高效沉默至关重要的设计元素，这些元素均经过系统的实验评估，以实验评估结果为基础打造出目前最强大的基因沉默平台。

 

高效的microRNA表达框架——shRNA表达研究的利器

 

    通过对大量的人类microRNA表达框架进行测试，发现其所表达加工的shRNA对靶基因沉默效率不尽相同，不同的MicroRNA表达框架呈现出截然不同的功能性。Dharmacon根据不同的microRNA表达框架的实验评估最终选择了可以高效加工shRNA的microRNA表达框架，并确保这些表达框架加工的shRNA可以高效特异性地沉默靶基因。在此过程中，Dharmacon发现：

• 不是所有的microRNA表达框架都能够高效加工shRNA。
• 某些microRNA表达框架也可以加工出具有活性的”passenger”链，从而降低基因沉默特异性。

   Dharmacon选择兼具功能强大的成熟链活性和最小“passenger”链功能的MicroRNA表达框架来构建SMARTvector shRNA的表达载体。图5显示6个人源的microRNA表达组件的“passenger”链功能的比较分析结果，只有那些由成熟链引起的具有很高水平的沉默功能同时有最小的“passenger”链功能的microRNA组件才可以作为候选表达组件。

     Dharmacon研发出第一个shRNA设计软件，用来设计和筛选沉默功能强大，且具超强特异性的沉默组件。
    该设计软件综合考虑了如下因素来挑选和设计与专利的MicroRNA表达组件相容的针对靶基因的序列：

• 双链偏好性的热力学特性；
• 特定局部和全长中的GC含量；
• 影响后续加工的二级结构；
• 点依赖性的核苷选择参数；
• “seed-region”区互补序列的过滤。

shRNA慢病毒独特的表达框架，保证了其高效导入众多细胞

不用抗性筛选即可持久沉默靶基因

如图8所示：在嘌呤霉素选择压力下，用 SMARTvector GAPD阳性对照转染SH-SY5Y细胞，图8显示了GAPD基因敲除后的荧光显微镜成像结果。

运用嘌呤霉素筛选可获得长期稳定沉默的细胞株

   Dharmacon SMARTvector shRNA慢病毒颗粒感染后的细胞可通过嘌呤霉素抗性筛选获得持久稳定的靶基因沉默细胞系（或者单个的细胞克隆）。图9显示用Dharmacon SMARTvector shRNA慢病毒颗粒感染后得到的稳定基因沉默。

SMARTvector shRNA----即开即用型的成熟病毒颗粒 

     研究者在实验室自己构建并生产用于RNAi实验的慢病毒颗粒需要花费很大的成本，包括时间、劳动力和金钱。Dharmacon的SMARTvector shRNA产品提供给客户为高质量、高滴度包装好的即开即用型的病毒颗粒。省却客户自己在构建shRNA病毒颗粒过程中需要设计功能性shRNA序列、克隆到特定的表达框架和生产足够高质量的病毒颗粒等诸多麻烦。Dharmacon通过与其战略伙伴Lentigen公司合作，提供的SMARTvector shRNA干扰产品最终为经过纯化浓缩过的滴度大于10⁸ TU/mL的成熟病毒颗粒。

高质量、高滴度的病毒颗粒极大地减少了细胞毒性，也极大地降低了脱靶效应。

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